【正确答案】(1)成功提取mRNA，最关键的问题是抑制RNase酶活性。原因如下： mRNA呈单链状，容易受到核酸酶的攻击。RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。对RNA的操作要求比DNA操作更严格，要保证实验环境、所用器皿及溶液均没有RNA酶的污染，因此提取mRNA时最关键的问题是抑制RNase酶活性，如必须带手套等。 (2)从总RNA中分离mRNA的原理如下： ①常用异硫氰酸胍-苯酚抽提法提取总RNA。原理是：Trizol试剂主要由异硫氰酸胍和苯酚组成，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚；而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，使RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层主要为RNA，有机层主要为DNA和蛋白质。 ②常用寡(dT)-纤维素柱层析法获得高纯度mRNA。原理为：利用mRNA 3'末端含有poly(A)的特点，当RNA流经寡(dT)纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异性地结合在柱上，再用低盐溶液或蒸馏水洗脱mRNA。经过两次寡(dT)纤维柱后可得到较高纯度的mRNA。具体操作是：用polyAT Tract mRNA分离系统将生物素标记的寡(dT)引物与细胞总RNA温育，加入与微磁球相连的抗生物素蛋白以结合poly(A) mRNA，通过磁场吸附作用将poly(A) mRNA从总RNA中分离。