结构推理 现有试剂:pH7.4磷酸盐缓冲液、一碘乙酸、硫酸肼、10/%三氯乙酸、酵母液、1mol/L NaOH、2,4-二硝基苯肼,请叙述糖酵解中间产物磷酸丙糖的鉴定方法及其原理。
【正确答案】(1)方法:取3支试管,编号为1、2、3。试管1、2、3分别加入pH7.4磷酸盐缓冲液2.0mL,并且试管1、2中加入一碘乙酸0.5mL、硫酸肼0.5mL,然后在试管1中加入10/%三氯乙酸1.0mL,混匀,静置10min,3000r/min离心10min。然后将上清液0.5mL对号转移入另外1、2、3三支试管中,分别加入1.0mol/L NaOH 3.5mL。此时3支试管发生的情况分别为:试管1呈黄色,试管2呈深紫红色,试管3呈浅紫红色。借此可鉴定糖酵解中间产物有磷酸丙糖的生成,而且是由3-磷酸甘油醛脱氢酶催化生成的。
   (2)原理:酵母液在适宜的条件下,其含有的糖会在酶体系的作用下进行酵解反应,当反应进行到生成2分子磷酸丙糖时,进一步的变化是在3-磷酸甘油醛脱氢酶催化下进行的。-SH是3-磷酸甘油醛脱氢酶的必需基团,加入碘乙酸可与此酶的-SH起反应,从而使该酶失去活性,酵解反应就停留在磷酸丙糖阶段。然后以硫酸肼为稳定剂,保护磷酸丙糖不至于自发分解,使其不能向其他方向变化,结果磷酸丙糖在试管2中堆积,再碱化,并于室温放置10min,使磷酸丙糖中的磷酸基水解脱去,然后再与2,4-二硝基苯肼反应生成苯腙,后者在碱性溶液中呈紫红色。但在试管1中由于开始时加入10/%三氯乙酸,它可使酵母液中的酶变性失活,无法进行糖酵解,没有磷酸丙糖的生成,故无苯腙的生成,溶液呈现2,4-二硝基苯肼的颜色,即黄色。而试管3中,碘乙酸、硫酸肼、10/%三氯乙酸都是在糖酵解反应完成之后加入的,即试管3中进行的是糖酵解的自然过程,虽然有磷酸丙糖的生成,但量比较少,生成的苯腙也就少,在碱性溶液中呈现的紫红色比较浅。
【答案解析】