问答题 (陕西师范大学2005年考研试题)试论述核酸变性和复性的影响因素,及变性和复性的应用途径。
【正确答案】正确答案:(1)影响变性速度的因素有:①G-C对含量越多,T m 值越大。(G+C)%=(T m 一69.3)×2.44;②溶液的离子强度过低会使T m 下降;③溶液的pH高,则T m 低,超过11.3则DNA完全变性,低于5则DNA会脱嘌呤;④变性剂:甲酰胺、尿素、甲醛等使T m 下降。 (2)影响复性速度的因素有:①单链片段的浓度高,则复性的速度快;②单链片段大,则复性的速度慢;③单链片段的重复序列多,则复性的速度快;④维持一定的离子强度,可加快复性的速度。 (3)变性和复性的应用途径有:①Southern印迹杂交;②Northem印迹杂交;③原位杂交;④基因芯片;⑤基因克隆时片段之间的退火和连接:⑥PCR实验中引物和模板之间的退火。
【答案解析】