【正确答案】TAIL-PCR的基本原理：以基因组DNA为模板，利用依照目标序列旁的已知序列设计3个较高退火温度的嵌套特异性引物(special prime，SP)和1个具有低Tm值的短的随机简并引物(Arbitrary degenerate prime，AD)相组合，通过3轮具热不对称的温度循环的分级反应来进行PCR扩增，获得已知序列的侧翼序列。 TAIL-PCR一般分为3次反应： ①第一次PCR反应是TAIL-PCR的重要环节，由5次高严谨循环、1次低严谨循环、15次热不对称的大循环构成。通过5次高严谨循环使SP1与已知的序列退火并延伸，提高目标序列的浓度；1次低严谨循环使简并引物结合到较多的目标序列上，随后进行15次TAIL循环。经过上述循环得到不同浓度的3种类型的产物：特异性序列(两端分别拥有SP1和AD)、非特异性序列Ⅰ(只有SP1，没有AD)和非特异性序列Ⅱ(两端均为AD) ②第二次PCR反应：将第一次反应的产物稀释1000倍作为模板，以SP2和AD为引物，进行12个TAIL-PCR循环，特异性序列被选择性地扩增，而非特异性序列被压制到极低的含量。 ③第三次PCR反应：将第二次反应的产物稀释1000倍作为模板，以SP3和AD为引物，通过15次热不对称的大循环可以得到较高含量的与已知序列邻近的目标序列。