结构推理 利用双脱氧末端终止法(Sanger法)测定DNA一级结构的原理与方法?
【正确答案】原理是采用核苷酸链终止剂-2',3'双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3',5'-磷酸二脂键所需要的3'-OH,一旦掺入到DNA链中,此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则,每当DNA聚合酶需要dNMP掺入到正常延长的DNA链中时,就有两种可能性:一、掺入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止;二、掺入dNTP,使DNA链仍可继续延长,直至掺入下一个ddNTP。根据这一方法,就可得到—组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后,聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。
【答案解析】