问答题 如何利用T4 DNA聚合酶进行双链DNA的3'端标记?
【正确答案】首先利用T4 DNA聚合酶的3'→5'外切核酸酶的活性在缺乏dNTP的条件下切割双链DNA,产生突出的5'端,然后加入放射性标记的dNTP,利用T4 DNA聚合酶的5'→3'合成酶的活性进行填补合成,得到两端的3'端都是标记的双链DNA分子。如果被标记的双链DNA中有限制性内切核酸酶的切割位点,则可以得到两段放射性标记的探针。
【答案解析】