【正确答案】(1)PCR一限制性片段长度多态性:它是根据突变序列是否位于限制性内切酶的酶切位点内而设计的对PCR产物作限制性片段长度多态性分析的技术。是目前最简单的一种检测点突变的技术,应用十分广泛。(2)等位基因特异性寡核苷酸:是有寡核苷酸探针和PCR产物进行杂交以检测点突变的方法。缺点是必须严格控制杂交条件,否则易出现假阳性或假阴性,另一缺点是检测一个突变点需一对引物和一对寡核苷酸探针,成本相对较高。反向杂交(RDB)的优点是改变了传统的杂交技术一次只能检测一种突变的不足,一次杂交即可筛查出被检DNA中多种突变,尤其适用于检测基因的多态性。(3)单链构象多态性SSCP的敏感性随PCR产物长度的增加而降低,只适用于检测200bp以内的DNA片段,只能确定被检片段中有无突变存在,不能确定突变位置和突变性质。SSCP的实验关键是控制各种条件以避免在操作过程中DNA单链分子复性为双链。优点是技术简便,而无特殊设备以及可同时分析较大量样本,是目前最广泛应用的筛查点突变的技术之一。(4)变性梯度凝胶电泳:在设计引物时使被扩增目的片段的两端含有不同的T。一端较高,另一端相对较低。DGGE具有较高的灵敏度和较好的重复性,但只能确定被检片段中有无突变存在,不能确定突变位置和突变性质。DGGE实验成功与否的关键之一是被检片段泳动至变性浓度相应的部位时能否部分解链,这要求被检片段两端的Tm值有一定的差异。(5)融点曲线分析:是根据正常序列和突变序列因不同Tm而产生不同的融点曲线原理而设计的。实施依赖于特定的仪器。优点是PCR产物不必经纯化处理,扩增反应后将正常标本和被检标本混合并加热变性使其形成异源二聚体即可进行检测。样品分析过程快捷,可同时进行大量分析,检测成本低廉,结果重复性可达100%等。(6)PCR产物的序列分析:主要用于分子克隆时对于目的基因扩增片段的序列鉴定,以及对致病基因检测时分析扩增片段中点突变的位置和性质。优点是只要在载体的切口处加上游离的“T”,使其与产物3’端外加的“A”互补,PCR产物即可很方便地与载体连接。
【答案解析】