【正确答案】平齐末端是指当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的平整的切口。当载体和外源基因是平齐末端时实现载体与外源基因重组的方法如下: (1)平端连接 DNA连接酶可以催化相同或不同限制性内切酶切割的平端之间的连接,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键;需要时也可将黏性末端经特殊酶处理后,使单链突出端被补平或削平,变为平端后再进行连接。 (2)同聚物加尾连接 同聚物加尾法是利用末端转移酶(以Mg2+作为辅助因子)在载体及外源双链DNA的3'端各加上一段寡聚核苷酸,制成人工黏性末端,外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸,如dA(dG)和dT(dC),然后在DNA连接酶的作用下连接成为重组的DNA。这种连接方式也可以看成是一种特殊的黏性末端连接形式。 (3)人工接头连接 人工接头连接又称连接子,是指含有某些限制酶切点的寡核苷酸片段,在T4 DNA连接酶(可催化限制性内切酶切割产生DNA平齐末端的连接)的作用下,将接头连接到目的DNA片段的两端,然后再用相应的限制酶切割,使外源DNA片段的两端具有了黏性末端,可以与相应的载体进行连接。
【答案解析】