【正确答案】正确答案：(1)埃德曼降解(Edman降解)法。1950年P．Edman公布了一项新的氨基酸序列的测定技术，即运用上述苯异硫氰酸酯与氨基酸的反应(Edman反应)。这种技术每次都只是从蛋白质的N端解离和鉴定一个氨基酸残基，这是一项使蛋白质序列分析革命化的技术。1967年Edman和Begg建成了多肽氨基酸序列分析仪。Edman降解测序主要涉及耦联、水解、萃取和转换等4个过程。 1)耦联：使用苯异硫氰酸酯(PITC)在pH 9．0的碱性条件下对蛋白质或多肽进行处理，PITC与肽链的N-端的氨基酸残基反应，形成苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物，即PTC-肽。 2)水解：PTC-肽用三氟乙酸处理，N一端氨基酸残基肽键被有选择地切断，释放出该氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。 3)萃取：将该衍生物用有机溶剂(例如氯丁烷)从反应液中萃取出来，而去掉了一个N一端氨基酸残基的肽仍留在溶液中。 4)转化：萃取出来的噻唑啉酮苯胺衍生物不稳定，经酸作用，再进一步环化，形成一个稳定的苯乙内酰硫脲(PTH)衍生物，即PTH-氨基酸。 Edman降解法测序每次只能测定几十个氨基酸残基，所以要测定较大蛋白质的氨基酸序列，需要将其降解为一些肽段，经HPLC分离出各个肽段，然后再进行Edman降解测序。 (2)串联质谱法。串联质谱法的原理是根据肽段经惰性气体碰撞诱导裂解产生的一系列有规律的碎片离子之间的质量差来推断氨基酸序列。 在电喷雾质谱中最有用的是y和b系列离子，这是在肽键处断裂产生的离子，该方法使蛋白质及多肽的测序不再受翻译后修饰及纯度的限制，与常用的三级．四级电喷雾串联质谱或离子阱电喷雾串联质谱相比较，四级杆．飞行时间电喷雾串联质谱(Q-FOF-ESI-MS／MS)具有更高的分辨率、灵敏度和质量准确度。更适合蛋白质及多肽测序，测定结果准确可靠，测序数据不需要复杂的处理，结果容易进行解释。串联质谱测序法是Edman降解测序法的最好补充，具有灵敏、快速和样品用量少的优点。 实验方法(以电喷雾四级杆正交加速-飞行时间串联质谱仪O-TOF为例)： 将待测肽段用0．1％甲酸／乙腈，水(50：50)稀释成浓度为1pmol／μl溶液。 采用注射泵直接进样，流速为1μl／min，雾化气为氮气，碰撞气体为氩气。 Q-TOF2配备纳升喷雾源，所有测定均在正离子方式下进行。质谱仪用Glu-fib的串联质谱碎片校正，质量准确度小于0．1。源温80，锥孔电压50。毛细管电压3000V，TOF加速电压为9．1Kv，MCP检测器电压为2200V。 收集质谱图数据，用Micromass的专用软件MaxEnt3、Biolynx、MasSeq分析数据。