【正确答案】(1)(首先解释“蛋白质电泳”)蛋白质由氨基酸残基组成,在溶液中蛋白质分子由于氨基酸的解离而带有电荷;蛋白质带电粒子在电场中会发生向与所带电荷相反的电极移动。蛋白质电泳迁移速度与蛋白质分子质量、分子形状、电荷性质有关。
(2)(解释SDS-PAGE基本原理)SDS-PAGE为SDS-聚丙烯酰铵凝胶电泳。SDS即十二烷基硫酸钠,一种蛋白质变性剂,它可以破坏蛋白质分子中的氢键和疏水作用,在巯基乙醇的存在下,使蛋白质多肽链充分展开,并以1.4:1的质量比与蛋白质结合成复合物;由于SDS带负电,大量SDS分子的介入导致蛋白质分子带上大量负电荷,这样就消除了不同蛋白质分子原来所带电荷上的差异;蛋白质结合SDS后分子形状发生变化,成为长棒状,这样就消除了不同蛋白质分子在形状上的差异。因此,在SDS存在下,蛋白质在电场中泳动时,其迁移率仅与蛋白质的分子质量有关。
(3)(描述分子质量和迁移率的关系)蛋白质分子量“M”的对数与相对迁移率“μ”的关系式为:logM=a-bμ(a,b为常数);对已知分子量的一系列标准蛋白质进行SDS-PAGE,分别测定各标准蛋白质的迁移率,以迁移率为横坐标,以蛋白质分子质量对数为纵坐标,即得到一个呈负线性关系的标准曲线,见下图。在同样电泳条件下测出未知蛋白的迁移率,即可在标准曲线上查出未知蛋白的分子质量。
(4)(强调变性电泳)由于SDS-PAGE是变性电泳,因此对多亚基蛋白来说,测得的分子质量是蛋白质亚基的分子质量。
[*]
【答案解析】