问答题
进行蛋白质分子SDS-PAGE电泳分析的目的是什么?进行蛋白质分子SDS-PAGE电泳分析时,上样缓冲液中有哪些主要成分?如果分别缺少这些成分,电泳行为会怎样?请予说明。
【正确答案】正确答案:(1)进行蛋白质分子SDS—PAGE电泳目的是分离蛋白质,也可以测定蛋白质分子相对分子质量的大小。 (2)上样缓冲液中的主要成分有Tris-HCl、甘油、SDS、β-巯基乙醇、溴酚蓝、去离子水。 Tris-HCl为缓冲溶液,溶解蛋白质,调节样品的pH值,缺少它不能使样品处在适当的pH环境中是蛋白质在电场中浓缩,得不到电泳条带;甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,缺少它会使样品飘出点样孔;SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率,缺少它提取的蛋白质将会降解;β-巯基乙醇催化蛋白质解聚,解离成亚基或单个肽链,缺少它蛋白质分子:不能打开,仍呈聚体状态或者球状结构;溴酚蓝起到指示的作用,显示电泳的进程,以便适时终止电泳,缺少它将不能指示电泳进程,不知何时终止电泳.
【答案解析】