问答题 分子生物学的实验室最常见的工作是要培养大肠杆菌,培养大肠杆菌的培养基中常加入不同种类的抗生素,这些抗生素的作用是什么?说出两种培养大肠杆菌的主要目的和原理。
【正确答案】正确答案:(1)加入抗生素是为了抑制杂菌,防止杂菌污染;也用于检测目的基因是否被导入成功,防止菌株携带的质粒丢失。 (2)培养大肠杆菌的主要目的和原理。 (a)重组质粒DNA转化大肠杆菌。 目的:将重组质粒DNA导入大肠杆菌,使目的基因随大肠杆菌在细胞内复制、扩增。 原理:氯化钙转化法,是采用CaCl 2 处理大肠杆菌细胞,提高其细胞膜的透性,制备成感受态细胞。然后用热击的方法,严格控制温度和作用时间,将重组质粒DNA导入大肠杆菌细胞,并用含氨苄青霉素的LB固体培养基鉴定转化结果,已转化的菌体可形成菌落(因质粒上有抗氨苄青霉素的基因)。 (b)目的基因在大肠杆菌中的蛋白质的原核表达。 目的是通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白,在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有重要意义。原理在于大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点:易于生长和控制;用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵;有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。 原核表达一般程序:获得目的基因一准备表达载体一将目的基因插入表达载体中(测序验证)一转化表达宿主菌一诱导靶蛋白的表达一表达蛋白的分析一扩增、纯化、进一步检测。 (c)用于分子生物学的研究:如DNA复制、修复等的研究。
【答案解析】