问答题
指出从分子排阻层析柱上洗脱下列蛋白质时的洗脱顺序,并回答为什么?分离蛋白质的范围是5000到400000。
蛋白质
相对分子质量
肌红蛋白(马心肌)
过氧化氢酶(马肝)
细胞色素c(牛心肌)
肌球蛋白(鳕鱼肌)
糜蛋白酶原(牛胰)
血清清蛋白(人)
16900
247500
13370
524800
23240
68500
【正确答案】
【答案解析】
根据分子排阻层析的原理,当不同大小分子的蛋白质混合液借助重力通过层析柱时,各物质在柱内同时进行着两种不同的运动:垂直向下的移动和无定向的扩散运动。由于层析柱中装入的填充颗粒具有大量微孔,这些微孔只允许较小的分子进入颗粒,而大于颗粒微孔的分子则不能进入而被排阻。当用洗脱液洗脱时,被排阻的相对分子质量大的蛋白质先被洗脱下来,相对分子质量小的后被洗脱下来。
因此其洗脱出来的先后顺序是:肌球蛋白→过氧化氢酶→血清清蛋白→糜蛋白酶原→肌红蛋白→细胞色素c。
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