简介DNA聚合酶Ⅰ和Klenow大片段的结构与功能。
 
【正确答案】(1)DNA聚合酶Ⅰ的结构与功能 DNA聚合酶Ⅰ可以被蛋白酶切成2个区域: ①占DNA聚合酶Ⅰ蛋白2/3的C端区域:相对分子质量68000,具有DNA聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性,既可合成DNA又可降解DNA,保证DNA复制的准确性。 ②占DNA聚合酶Ⅰ蛋白1/3的N端区域:相对分子质量35000,具有5'→3'核酸外切酶的活性。可作用于双链DNA;又可水解5'末端或距5'末端核苷酸处的磷酸二酯键;还可用于除去冈崎片段5'端RNA引物,使冈崎片段间缺口消失,保证连接酶将片段连接起来。 (2)Klenow大片段的结构与功能 Klenow大片段是指用蛋白酶水解DNA聚合酶Ⅰ所得的大片段C端区域,具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性。Klenow大片段在基因工程中有广泛的应用,主要有: ①根据修复反应制备平末端; ②标记DNA中3'突出末端; ③双脱氧末端终止法进行DNA序列分析; ④定点突变中用于cDNA第二链的合成; ⑤用引物延伸法制备单链DNA探针等。
【答案解析】