问答题 请列举10种类型的分子生物学常用克隆与表达载体(各5种),并简要说明其用途或特点。无
【正确答案】

(1)分子生物学常用克隆载体

①pSC101质粒载体

用途或特点:pSC101质粒载体是第一代分子克隆载体,含有tetr,属于严紧型载体,但其拷贝数低。用于低拷贝系统。

②ColE1质粒载体

用途或特点:ColE1质粒载体属于松弛型载体,拷贝数较高。用于需要大量基因拷贝系统。

③pBR322质粒载体

用途或特点:pBR322质粒载体由3部分组成:a.pSE2124质粒易位子Tn3的氨苄青霉素抗性基因(ampr);b.pSC101质粒的四环素抗性基因(tetr);c.ColE1的派生质粒pMB1的DNA复制起点(ori)。因此其具有抗氨苄青霉素和四环素的特点,可用于蓝白斑筛选实验。

④pUC质粒载体

用途或特点:pUC质粒载体包括4部分:a.pBR322质粒的复制起点(ori);b.pBR322质粒的ampr;c.β-半乳糖酶基因(lacZ)启动子;d.lacZ′基因:编码α-肽的DNA序列。可用于蓝白斑筛选实验。

⑤RSF2124质粒载体

用途或特点:RSF2124质粒载体是ColE1的衍生质粒,含有氨苄青霉素抗性标记基因。实验中可用氨苄青霉素做筛选。

(2)分子生物学常用表达载体

①λ噬菌体

用途或特点:λ噬菌体是一类细菌病毒,能高效高特异性地侵染宿主细胞,然后或自主复制繁殖,或整合入宿主基因组中潜伏起来,而且一定条件下上述两种状态还会相互转化。一般用于溶原性裂解实验。

②柯斯质粒

用途或特点:柯斯质粒可以接受大至45kb的插入,应用与λ噬菌体文库类似,但是稳定性较差,在大量复制的过程中容易出现缺失现象。多用于基因文库的构建。

③细菌人工染色体(BAC)

用途或特点:BAC能携带大片段DNA,约300kb。在每个细胞中一个载体能繁殖多个拷贝,多产DNA。用于大片段目的基因的转导实验。

④单链DNA噬菌体M13

用途或特点:单链DNA噬菌体M13的寄主是大肠杆菌,它由外壳包装蛋白和正链DNA基因组成,不裂解宿主细胞但抑制其生长。

⑤酵母人工染色体(YAC)

用途或特点:YAC可以容纳70~1000kb的外源片段,主要用于基因组做图、测序和克隆序列的比对。

【答案解析】