【正确答案】蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组质粒的筛选方法,根据载体的遗传特征筛选重组子。其分子机制为: (1)设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变,造成其编码的β-半乳糖苷酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽(即α-肽),从而不具有生物活性,即无法作用于X-gal产生蓝色物质。用于蓝白斑筛选的载体包括一段β-半乳糖苷酶的启动子、编码α-肽的区段和一个多克隆位点(MCS)。MCS位于编码α-肽的区段中,是外源DNA的选择性插入位点。 (2)在IPTG诱导下,质粒载体合成的β-半乳糖苷酶α-肽与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶互补,产生有活性的β-半乳糖苷酶,将无色化合物X-gal水解生成蓝色的溴氯吲哚,产生蓝斑。 (3)在MCS上插入外源DNA片段后,导致载体编码β-半乳糖苷酶的部分序列失活,带有重组DNA分子的宿主菌产生白斑。
【答案解析】