【正确答案】(1)cDNA差示分析法的原理 cDNA差示分析法根据PCR以指数形式扩增双链DNA模板,而仅以线性形式扩增单链DNA模板的特性,通过降低cDNA群体复杂性和更换cDNA两端接头等方法,特异性扩增目的基因片段。 (2)cDNA差示分析法的主要实验流程 ①将含目的基因的试验对象(Tester,T)与不含目的基因的供试探针(Driver,D)分别经4碱基切割酶处理,得到平均长度为256bp的代表群。 ②加12/24碱基接头,补平末端。 ③以24碱基的互补序列为引物进行PCR扩增。 ④将T改换新接头,D不加接头。按T:D为1:100的比例混合两组cDNA,在一定的反应体系中解链并进行杂交,产生3种形式的杂交体:D cDNA与D cDNA的杂交体、D cDNA与T cDNA的杂交体以及T cDNA与T cDNA的杂交体。 ⑤设计新接头引物,通过PCR,T cDNA与T cDNA的杂交体呈指数扩增。
【答案解析】