3H-TdR标记法是用于测定细胞周期时间长短的经典方法。(1)用3H-TdR短期喂养细胞来标记S期的细胞:(2)洗脱3H-TdR,用正常培养基(不含任何标记物)继续培养细胞;(3)每隔一定的时间取样,进行放射自显影;(4)计算被标记的分裂期的细胞百分比,得到如下图实验结果。请估算出该细胞系的一个周期的总时间和周期中各个时期持续的时间。
无
用3H-TdR对测定细胞进行脉冲标记,定时取材并利用放射自显影技术显示标记细胞,统计标记的有丝分裂细胞的比例(PLM),以标记后的时间为横坐标,以标记的有丝分裂细胞的比例为纵坐标,通过读图测定细胞周期,一般常采用半高度读数法。
①待测细胞经3H-TDR标记后,所有S期细胞均被标记。
②S期细胞经G2期才进入M期,所以一段时间内PLM(统计标记的有丝分裂细胞的比例)=0。
③开始出现标记M期细胞时,表示处于S期最后阶段的细胞,已渡过G2期,所以从PLM=0到出现PLM的时间间隔为TG2(G2期的持续时间)。
④S期细胞逐渐进入M期,PLM上升,到达到最高点的时候说明来自处于S最后阶段的细胞,已完成M,进入G1期。所以从开始出现PLM到PLM达到最高点(≈100%)的时间间隔就是TM(M期的持续时间)。
⑤当PLM开始下降时,表明处于S期最初阶段的细胞也已进入M期,所以出现PLM到PLM又开始下降的一段时间等于TS(S期的持续时间)。
⑥从PLM出现到下一次PLM出现的时间间隔就等于TC(一个细胞周期的持续时间),根据TC=TG1+TS+TG2+TM即可求出的TG1长度。