问答题 什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?
【正确答案】同裂酶是一类识别序列不完全相同,但是产生的黏性末端至少有四个碱基相同的限制性内切核酸酶。用这些限制性内切核酸酶处理载体和外源DNA得到的末端可以通过黏性末端连接法连接。
   同裂酶产生的黏性末端虽然可以像完全亲和的黏性末端那样进行连接,但是它与完全亲和的黏性末端连接不同的是,连接后的产物往往失去原有的限制性内切核酸酶的切点,但是能够被另外一种同裂酶识别。这样用同裂酶进行体外重组时,在限制性内切核酸酶切割反应之后不必将原有的内切酶失活就可直接进行重组连接。由于连接体系中有原有的限制性内切核酸酶的存在,就不会发生载体自连,从而保证了载体同外源DNA的连接。所以在这种连接反应中不必用碱性磷酸酶进行载体的脱磷反应而得到最高的连接效率。
   反应中通常要涉及三种不同的限制性内切核酸酶,其中两种是识别六碱基的酶,另外一种是识别四碱基的酶。
【答案解析】