【正确答案】差异克隆:利用来源不同DNA之间的表现度差异来分离差异表达基因的功能克隆方法。在任何组织中都表达的基因是管家基因,在大多数cDNA文库中都出现。用一个来源的cDNA去除第二个来源中共同的RNA,留下独特的RNA用于文库构建。
【答案解析】[考点]基因克隆的方法。常见的基因克隆的方法有:
(1)基因捕获技术:基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。基因捕获载体是带有报告基因和/或选择标记基因的不完整的基因表达载体;这些载体所携带的基因只有整合到宿主功能基因内部并且与融合的宿主基因编码框一致时才能得到表达。经典的基因捕获载体有:增强子捕获载体、基因捕获载体和启动子捕获载体。狭义的基因捕获载体是指插入到结构基因内部从而捕获该基因的载体,分为内含子捕获载体和外显子捕获载体。启动子捕获载体由一个无启动子的报告基因和选择标记基因组成,只有在捕获载体插入到内源基因的外显子中,且两开放阅读框一致的时候才会有报告基因和被捕获的内源基因上游编码区的融合蛋白的表达。利用某些遗传元件的遗传特性也可以构建非常有用的捕获载体。
(2)功能克隆:功能克隆可分为3个方面:①利用序列信息—这不需要克隆基因的表达;②利用基因表达的信息—这不需要克隆基因的表达;③利用蛋白功能—这需要克隆基因的表达,只适用于cDNA文库。
(3)定位克隆:如果基因的大致位置知道,它可以在需要序列或生化功能知识的基础上被克隆。定位克隆从鉴定附近已经克隆的标记开始,目标基因的标记可以通过连锁分析或低分辨率物理作图确定。
(4)差异克隆:利用来源不同DNA之间的表现度差异来分离差异表达基因的功能克隆方法。在任何组织中都表达的基因是管家基因,在大多数cDNA文库中都出现。用一个来源的cDNA去除第二个来源中共同的RNA,留下独特的RNA用于文库构建。