【正确答案】正确答案:蛋白质的分离纯化方法:①根据分子大小的不同,有透析或超滤、离心沉淀凝胶过滤层析等技术;②根据蛋白质溶解度的不同,有等电点沉淀、盐析(常用硫酸铵)、有机溶剂沉淀等技术;③根据电离性质的不同,有电泳、离子交换层析等技术;④根据蛋白质特异亲和力的不同,有亲和层析技术。 (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳。其原理是聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。大致步骤:①准备电泳槽、电泳仪;②凝胶制备;③灌胶;④样品预处理和加样;⑤电泳。 (2)离子交换层析法(IEC)。是从复杂的混合物中,分离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性、极性,也就是所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来。离子交换层析法大致分为五个步骤:①离子扩散到树脂表面;②离子通过树脂扩散到交换位置;③在交换位置进行离子交换;被交换的分子所带电荷愈多,它与树脂的结合愈紧密,也就愈不容易被其他离子取代;④被交换的离子扩散到树脂表面;⑤冲洗液通过,被交换的离子扩散到外部溶液中。
【答案解析】