如何鉴定activation tagging的转基因植物中是哪个基因的表达上调而导致所观测的表型?
 
【正确答案】activation tagging的中文名称是基因激活标签技术,是植物基因克隆与基因功能鉴定的一种方法。将多个拷贝的增强子或启动子序列构建到T-DNA或转座子载体后,将T-DNA或转座子插入到植物基因组中,增强子会激活邻近上下游基因的表达,产生激活标记突变。鉴定方法如下: (1)Tail-PCR克隆上下游序列,进行比对找出对应基因; (2)Western blotting检测,观察相应的蛋白质是否有所提高; (3)构建相应的35S-promoter-待检测基因的激活标签载体转入植株,以无35S增强子序列的载体作为对照。观察表型,分析待检测基因的表达。
【答案解析】