问答题 试述外源基因与载体的主要连接方式。
【正确答案】外源基因与载体的主要连接方式有以下几种。
   (1) 黏性末端的连接方式。①同一限制酶切割位点连接:由同一限制性内切酶切割的不同DNA片段具有完全相同的末端。当这样的两个DNA片段一起退火时,黏性末端单链间进行碱基配对,然后在DNA连接酶催化作用下形成共价结合的重组DNA分子。②不同限制性内切酶位点连接:由两种不同的限制性核酸内切酶切割的DNA片段,具有相同类型的黏性末端,即配伍末端,也可以进行黏性末端连接。
   (2) 平端连接。DNA连接酶可催化相同和不同限制性核酸内切酶切割的平端之间的连接。原则上讲,限制酶切割DNA后产生的平端也属配伍末端,可彼此相互连接;若产生的黏性末端经特殊酶处理,使单链突出被补齐或削平,变为平端,也可施行平端连接。
   (3) 同聚物加尾连接。同聚物加尾连接是利用同聚物序列,如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接。在末端转移酶作用下,在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出黏性末端,而后进行黏性末端连接,这是一种人工提高连接效率的方法,属于黏性末端连接的一种特殊形式。
   (4) 人工接头连接。对平端DNA片段或载体DNA,可在连接前将磷酸化的接头或适当分子连到平端,使产生新的限制性核酸内切酶位点,再用识别新位点的限制性核酸内切酶切除接头的远端,产生黏性末端,这也是黏性末端连接的一种特殊形式。
【答案解析】