【正确答案】
【答案解析】通过凝胶过滤纯化之后,进行蛋白质N端分析(选用针对α氨基的特异性反应),阳性为直线式结果,阴性为闭环式结构。在进行分析的同时,用一个阳性对照作为鉴定反应体系没有问题。
可选用的蛋白质N端分析法有两个。
DNFB法:蛋白质的末端氨基与DNFB在弱碱性溶液中作用生成DNP-蛋白质。酸性条件下,100℃高温水解时断开肽链。DNP-氨基酸能溶于有机溶剂(如乙醚)中,这样可与其他氨基酸和ε-DNP赖氨酸分开。再经双向滤纸层析或柱层析,可以鉴定黄色的DNP氨基酸。
DNS-Cl法:荧光试剂二甲氨基萘磺酰氯,即DNS-Cl(Dansyl-Cl),能与所有氨基酸的氨基结合,生成荧光物质DNS-氨基酸。DNS-Cl也能与蛋白质或多肽的游离氨基结合,生成DNS-蛋白质或DNS-肽,经酸水解后释放出DNS-氨基酸。DNS-氨基酸在360nm或280nm波长的紫外光照射下,发出黄色荧光,很方便进行检测。也可以通过双向滤纸层析或柱层析进行鉴定。