【正确答案】正确答案：纯化方案和步骤如下： (1)收集菌体。将大肠杆菌培养液经过几次离心，可得到菌体沉淀。 (2)前处理，得到包涵体沉淀。重新悬浮菌体沉淀，用超声波法破坏大肠杆菌细胞壁，也可用机械研磨，高压挤压或溶菌酶处理等方法破坏细胞壁，离心可得到包涵体沉淀。 因为外源蛋白在大肠杆菌中表达时，常产生不溶性颗粒，即包涵体，但包涵体除主要成分是不溶性外源蛋白，还有杂质，此不操作得到了不溶性外源蛋白和少量杂质。 (3)粗分级分离，将外源蛋白与杂质分开，得到比较纯的外源蛋白。①溶解包涵体。常用的试剂为5～8mol/L的盐酸胍、6～8mol／L的尿素、SDS、碱性pH或乙腈／丙醇等；②分子筛层析。将包涵体溶解液注入分子筛层析柱，收集Mr49500的洗脱液体，再逐渐降低变性剂浓度而使外源蛋白进行再折叠，改变了蛋白质空间结构和外界环境因素，从而可逆地改变了蛋白质的溶解性。分子筛层析主要根据分子大小不同纯化蛋白质，当不同大小的分子蛋白质流经分子筛层析柱时，比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内网状结构，而被排阻在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶珠之间的空隙向下移动并最先流出柱外：比凝胶珠孔径小的分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外，这样由于不同大小的分子所经过的路径不同而得到分离。 (4)细分级分离，进一步纯化外源蛋白。亲和层析：将上一步收集到的溶液加到填有亲和介质的层析柱上时，外源蛋白被吸附在含有配体的琼脂糖颗粒表面上，而其他的蛋白质因对该配体无特异的结合部位而不被吸附，通过洗涤即可除去杂蛋白，被特异结合的蛋白质可用于含游离的相应配体溶液洗脱下来。 因X蛋白具有磷酸水解酶活性，且最适pH为8．0，可在层析柱中填入磷酸水解酶的底物，调节pH为8．0，X蛋白被吸附，其他杂蛋白被洗涤除去。 (5)鉴定。等电聚焦：经以上各步，已得到X蛋白的纯溶液，根据X蛋白质pI=4．2，利用等电聚焦法，如在pH为4．2的梯度处形成一个很窄的区带，才证明此纯溶液为X蛋白，结晶得到X蛋白的晶体。