【正确答案】percentage labeling mitosis(PLM)是最经典、用得最为广泛的研究细胞周期的方法,通过一次实验就可得到细胞周期及各周期时相的长短。用3H-TdR标记细胞(约30min)使处于S期的细胞DNA被标记,而其他周期的细胞不被标记。标记后不同时间分别进行放射自显影,计算PLM并作为纵坐标,以标记后时间作横坐标,由于S期细胞需经过G2期才开始有丝分裂,故开始一段时间PLM为零,当开始出有标记的分裂细胞时,表明原来处于S期最后阶段的细胞渡过G2进入M,故此时的时间为TG2;此后原来处于s期的细胞陆续进入M,PLM逐渐上升达到最高点,说明原处于S期最后的细胞已陆续完成有丝分裂进入G1期,故此时间间隔即开始出现标记有丝分裂细胞到开始到达最高百分数的时间为Tm。由于标记的细胞分布于整个S期(且S期一般比M期长得多)因而标记细胞进入分裂期要持续一段时间Ts,故标记有丝分裂达到最高峰后有一平坦期。当3H-TdR标记时,原处于G1期最后阶段细胞(未被标记)开始进入分裂相,PLM逐渐下降为零,说明标记时处于S期最早阶段细胞也全部脱离M期,此时间为Ts。当标记细胞再经一段时间间隔进行第二次分裂时又重复上一次过程出现第二个峰,这样就可把两次开始出现有标记细胞分裂的时间定为Tc(细胞周期时间)。这是理论上的曲线,实际没有理想均一的细胞群体,由于细胞个体之间的差异Tc不同,并且各个阶段时间不同故PLM并非是理想的梯形,并且第二峰也常呈衰减现象,故细胞周期各时间参数在图上尽可能用半高度法读取:TG2+1/2Tm=标记后到有50/%标记有丝分裂百分比的时间间隔可分别得到读数TG2和TG2+1/2Tm求出Tm,Ts=PLM曲线第一个峰的升支和降支中点(50/%)间的时间间隔,Tc=PLM由第一个峰和第二个峰升支中点(50/%)之间的时间间隔,TG1=Tc-(Ts+Tg2+Tm);Tm也可用显微缩时定格电影实测或公式Tm=Tc[log(1+MI)]/0.301,这样就可得到细胞周期时间及各时期所用时间。
【答案解析】