问答题 设计一个可以将样品中的蛋白质、核酸、脂肪和多糖逐步分离的实验。
【正确答案】正确答案:(1)使用分液法将样品中的脂肪分离出来。 先用普通漏斗把要分离的液体注入分液漏斗内,加塞。然后将分液漏斗静置在漏斗架上或铁架台的铁环中。待液体分成两层后,旋开旋塞,使下层液体从漏斗管流下。当下层液体流尽时,立即关闭旋塞,然后再从漏斗上口把上层液体倾倒出来。收集到的上层液体即为脂肪。下层液体继续分离提纯。 (2)使用盐析法将蛋白质分离出来。 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析。将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”,于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。 故在待分离液体中加入大量的盐直至蛋白质析出。得到的上清液待用,得到的蛋白质沉淀使用透析法纯化。 蛋白质在用盐析沉淀分离后,混有部分盐,可以采用透析法将蛋白质中的盐除去,即把蛋白质溶液装入透析袋内,用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,直至把蛋白中的盐除去得到纯化的蛋白。 (3)上一步骤中,液体里含有大量的盐,核酸可以与盐反应生成核酸盐,核酸盐可被有机溶液沉淀。在剩余的待分离液体中加入有机溶液,离心,得到的沉淀中含有核酸盐,上清液中含有多糖。 用70%的乙醇洗涤核酸盐沉淀,可以除去多余的盐分,得到一定纯度的核酸。 (4)使用透析法提纯上清液中的多糖,即可得到一定纯度的多糖。
【答案解析】