问答题 生物膜主要由脂类和蛋白质组成。大肠杆菌细胞膜的于重约1/3是脂类,而且它们都是磷脂。一种研究膜磷脂的方法是通过分离各种膜磷脂生物合成缺陷的突变体。试阐述一个过程以筛选大肠杆菌突变体,其细胞膜磷脂的合成是温度敏感的。用3-磷酸-L-甘油(GP)作为磷脂的前体。作为出发菌株,你得到的大肠杆菌菌株对GP的吸收是组成型的,但不能发酵GP,因为突变破坏了碱性磷酸酯酶和GP脱氢酶的活性。(提示:含大量放射性的细胞倘若贮藏几天或几周,随放射性衰变往往会死亡,可设法利用这一性质)
【正确答案】对亲代菌株诱变处理,在30℃,含GP的葡萄糖一盐基本培养基上生长诱变培养物,用盐溶液洗细胞,在相似但含3H标记GP基本培养基中悬浮,使细胞在42℃生长几代,野生型细胞将掺入3H-GP,突变体不能掺入。在盐溶液中洗细胞除去没利用的GP并在5℃贮存,直到3H衰变杀伤99.99/%的细胞。30℃涂平板测定检查在42℃有生长能力的存活菌落,检测42℃有3H-GP或32P-GP掺入能力的Ts突变体,在可与细菌一起沉积并可作为磷脂的培养基中生长,所希望得到的突变体不能将GP掺入磷脂。
【答案解析】