新克隆出一个植物蛋白基因,对其序列和结构域进行生物信息学分析后推测该蛋白可能以多亚基形式存在。请问:试图利用SDS-PAGE从混合蛋白质样品中分离、鉴定出可能存在的蛋白质复合体是否可行?为什么?请指出2种能分离蛋白质复合体的生物化学方法。
(1)利用SDS-PAGE从混合蛋白质样品中分离、鉴定出可能存在的蛋白质复合体的方法不可行。
(2)因为SDS-PAGE为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,在电泳样品制备过程中需要添加SDS和 巯基乙醇,属于变性电泳。SDS即十二烷基硫酸钠,是一种蛋白质变性剂,它可以破坏蛋 白质分子中的氢键和疏水作用;巯基乙醇是还原剂,可以破坏二硫键。在巯基乙醇存在 下,SDS使蛋白质复合体中的各亚基分离,并且亚基多肽链充分展开,故SDS-PAGE只能 分离蛋白质亚基。
(3)分离蛋白质复合体的生物化学方法有凝胶过滤柱层析、密度梯度超离心等。