问答题 欲通过紫外线诱变法获得枯草芽孢杆菌的营养缺陷型突变株,请说明紫外线诱变处理及营养缺陷型突变株筛选的主要步骤、各步所用培养基的特点及注意事项。
【正确答案】(1)诱变的过程:取少量菌种接种到LB培养液中。37℃培养12~14h;吸取菌液5ml于培养皿中,先用紫外线照射1min,再打开皿盖照射4min;吸取上述经紫外线诱变后的菌液0.5ml,加到含20ml完全培养基的150ml灭菌三角瓶中,在37℃下振荡培养过夜。
   (2)筛选营养缺陷型:
   取出培养液5ml,离心,洗涤两次,再取出约1/10菌体接种到5ml的基本培养基中,37℃下振荡培养;加入青霉素,培养。离心,取0.1ml涂布在完全培养基上,37℃下培养2~3d;用影印培养法将生长在完全培养基上的野生型和突变型菌落分别印在基本培养基、补充培养基和完全培养基上。
   (3)鉴定营养缺陷型:生长谱法
   将野生型和缺陷型分别接种到基本培养液中,37℃下培养24h;在缺陷型的培养液中加入完全培养液,培养离心,用生理盐水洗涤2次。将菌液和融化的基本培养基混合,倒平板,凝固后,将需要检测的物质分别放在培养基平板上;37℃下培养后,所需要的物质周围长出菌,此菌就是缺陷该物质营养缺陷型菌株。
【答案解析】