结构推理
假定你分离到一个E.coli的Thy-突变体,并推测有可能是thyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的thyA基因,测定突变的序列。(注:E.coli野生型的thyA基因的序列是已知的。)
【正确答案】为了扩增突变体的thyA基因,先设计一对引物,其中一个引物的序列与thyA基因的5'端相同,另一个引物同该基因的3'端互补。在引物的5'端加上合适Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,以便于后来的克隆。将染色体DNA同引物混合后,进行PCR扩增。然后进行琼脂糖凝胶电泳,纯化扩增片段,可以直接测序或克隆到合适的载体再测序。
【答案解析】