结构推理 蛋白质有哪些重要的物理化学性质?蛋白质分离提纯的一般步骤是什么?有哪些测定蛋白质分子量的方法?
【正确答案】蛋白质的物理化学性质: (1)蛋白质的分子的大小形状:蛋白质分子有一定的大小,一般在 6×103~106道尔顿之间。蛋白质分子有一定的形状,大多数是近似球形的或椭球形的。 (2)蛋白质的两性解离:在酸性溶液中,各种碱性基团与质子结合,使蛋白质分子带正电荷,在直流电场中,向阴极移动;在碱性溶液中,各种酸性基团释放质子,从而使蛋白质分子带负电荷,在直流电场中,向阳极移动。 在等电点时,蛋白质比较稳定,溶解度最小。因此,可以利用蛋白质的等电点来分别沉淀不同的蛋白质,从而将不同的蛋白质分离开来。不同的蛋白质有不同的等电点。 (3)电泳:在直流电场中,带正电荷的蛋白质分子向阴极移动,带负电荷的蛋白质分子向阳极移动,这种移动现象,称为电泳。在一定的电泳条件下,不同的蛋白质分子,由于其净电荷量、分子大小、形状的不同,一般有不同的迁移率。因此,可以利用电泳法将不同的蛋白质分离开来。在蛋白质化学中,最常用的电泳法有:聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳、毛细管电泳等。 (4)蛋白质的胶体性质:球蛋白溶液具有亲水胶体的性质。这种亲水胶体溶液是比较稳定的。其稳定因素有两个:一个是球状大分子表面的水化层;另一个是球状大分子表面具有相同的电荷,由于同性电荷的相互排斥,使得大分子不能互相结合成较大的颗粒。 (5)蛋白质的沉淀:盐析法、加酸或碱沉淀蛋白质、有机溶剂沉淀蛋白质、重金属盐沉淀蛋白质、生物碱试剂沉淀蛋白质、抗体对蛋白质抗原的沉淀。 (6)蛋白质的呈色反应:蛋白质分子的自由–NH2 基和–COOH 基、肽键,以及某些氨基酸的侧链基团,如:Tyr 的酚基、Phe 和 Tyr 的苯环、Trp 的吲哚基、以及 Arg的胍基等,能够与某种化学试剂发生反应,产生有色物质。 (7)蛋白质的光谱特征: 蛋白质的紫外吸收光谱:蛋白质不能吸收可见光,但是,能够吸收一定波长范围的紫外光。用紫外分光光度计可以记录溶液中蛋白质的光吸收随入射光波长变化而变化的曲线。此曲线就是蛋白质的紫外吸收光谱。 蛋白质的荧光光谱:蛋白质吸收280nm波长的紫外光之后,能够发射不同波长的荧光。其荧光强度随荧光波长变化而变化。这是蛋白质的荧光光谱。 蛋白质的分离提纯的一般步骤: (1)前处理; (2)沉淀分离; (3)分离纯化; (4)质量鉴定。 测定蛋白质分子量的方法: (1)沉降速度法; (2)凝胶过滤法; (3)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法。
【答案解析】