结构推理
已知E.coliA(遗传标记met-his-strr)和E.coliB(遗传标记met+his+sts)是一个转化系统,如以A菌株作为供体菌,B菌株作为受体菌,利用转化的方法筛选met+his+strr的转化子,如何析出转化子?(指出主要的实验步骤和检出原理)
【正确答案】(1)步骤:染色体DNA的提取(先将菌体悬浮于TE缓冲液中,加入溶菌酶和EDTA,放在冰浴上,再加入SDS,离心后加入RNase,加入蛋白酶液后,加入饱和酚和氯仿,离心收集水相,最后加入乙醇);转化(取培养至对数期的受体菌培养液,加入钙离子,冷冻离心收集菌体,再将其悬浮于上清液中;将染色体DNA与受体菌液上清液混合,37℃培养) (2)检出:将转化菌液、未接触受体菌的。DNA溶液、未接触DNA溶液的受体菌液分别涂布于含有链霉素的基本培养基上,37℃培养。原理:如果未接触受体菌的DNA溶液和未接触DNA溶液的受体菌液在平板上未长出,说明两种菌液中不含抗链霉素的杂菌。转化菌液能在MM上长出菌,说明它含有met+his+strr基因。
【答案解析】