问答题 说明在pH2.5、3.5、6、8、11.4时,四种核苷酸(AMP、GMP、CMP、UMP)所带的电荷数(或所带电荷数多少的比较),并回答下列问题:
   (1)电泳分离四种核苷酸时,缓冲液应取哪个pH比较合适?此时它们是向正极还是向负极移动?移动的快慢顺序如何?
   (2)当要把上述四种核苷酸吸附于阴离子交换树脂柱上时,应调到什么pH值?
   (3)如果用洗脱液对阴离子交换树脂上的四种核苷酸进行洗脱分离时,洗脱液又应调到什么pH值?这四种核苷酸的洗脱顺序如何?为什么?
【正确答案】
  pH2.5 pH3.5 pH6 pH8 pH11.4
UMP 负电荷最多 -1 -1.5 -2 -3
GMP 负电荷较多 -0.95 -1.5 -2 -3
AMP 负电荷较少 -0.46 -1.5 -2 -2
CMP 带正电荷 -0.16 -1.5 -2 -2

   (1)电泳分离四种核苷酸时应取pH3.5,在该pH时,这四种单核苷酸之间所带负电荷差异较大,它们都向正极移动,但移动的速度不同,依次为:UMP>GMP>AMP>CMP。
   (2)应取pH8.0,这样可使各核苷酸带较多负电荷,利于吸附于阴离子交换树脂。虽然pH11.4时核苷酸带有更多的负电荷,但pH过高对树脂不利。
   (3)洗脱液的pH应取pH2.5。当不考虑树脂的非极性吸附时洗脱顺序为CMP>AMP>GMP>UMP(根据pH2.5时核苷酸负电荷的多少来决定洗脱速度),但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附,嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗脱顺序为:CMP>AMP>UMP>GMP。
【答案解析】