【正确答案】固定化酶的方法可以分为两大类：
   (一)不溶性酶的方法
   (1)载体结合法，包括：①物理吸附法：主要靠范德瓦尔斯力、疏水作用，这些力较弱易于解吸；主要影响因素有，pH、溶剂性质、离子强度、酶量、吸附剂、吸附时间、温度；吸附方法有，静置法、电沉积法、反应器中直接吸附法、混合浴或振荡吸附法；优缺点，酶的高级结构及活性中心变化小、酶与载体作用力弱易于脱落，要找到适当的载体才行。②离子吸附法：通过离子键把酶结合于具有离子交换基的水不溶性载体，如DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖、CM-纤维素等；优缺点，操作简单、处理方法温和、酶的高级结构及活性中心不易被破坏、酶的回收率较高。但此法酶的结合力弱、易受缓冲液的种类及pH值的影响。③共价结合法：用双功能试剂使酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体结合，形成不可逆的连接；优缺点，酶的结合牢固不易脱落，能够反复使用，使用周期长，此法是最受欢迎的方法。但此法操作较复杂，条件较剧烈，制备活力很高的固定化酶较困难，同时还必须防止酶活性中心失活。基本方法，首先将载体的有关基团活化，然后再与酶的有关基团发生偶联反应，或者先在载体上接上一个双功能试剂，然后将酶偶联。④螯合或金属结合法：采用过渡金属化合物作为载体表面的手段，通过螯合作用将酶直接偶联，不必预先活化载体，这是一种较新的固定化技术。过渡金属有三价钛、五价钛、四价锆等)。
   (2)交联法：通过双功能试剂或多功能试剂在酶分子形成共价键，导致二维交联聚集体的形成，这种聚集体不溶于水。
   (3)包埋法：把酶定位于聚合物材料或膜的格子结构中，这样的结构可以防止膜被释放，而允许底物和产物自由通过。优缺点，酶本身并未结合在载体上，这样能够保持膜的自然性质，但只能用于小分子底物和产物的酶。包括：①凝胶包埋法：将酶和凝胶液混合，形成凝胶后酶就被包埋在凝胶内。这样的固定化酶易外漏，凝胶聚合过程中酶易失活。②纤维包埋法：将酶包埋在合成纤维的微孔中，此法优于凝胶包埋法。③微胶囊化法：将酶包在直径1100nm的球形半透性聚合物膜内，形成微胶囊化酶，此法可将多种酶同时固定化。
   (二)可溶性酶的方法
   (1)有衍生作用，结合于可溶性载体。用低分子或高分子化合物对酶进行化学修饰，而不发生不溶化作用的方法。优缺点，可用于水解大分子或固体底物，并使酶的稳定性提高，但此种固定化酶的分离纯化和回收较困难。
   (2)无衍生作用，利用物理方法把酶限制在半透膜、超滤膜或中空纤维中，底物和产物可以透过，酶不能通过。优缺点，此法简单易行，多种酶可以同时固定化，选择合适的膜可以有选择地控制底物和产物，酶还是可溶性的天然酶，但底物或产物过大不适于此法。包括超滤膜法和中空纤维法。
   (三)混合法
   在制备固定化酶时把两种或两种以上的方法相结合使用。