问答题
(中山大学2009年考研试题)假定某蛋白相对分子质量为180KDa,其一级结构可能是直线式的也可能是闭环式的。请分析是否有可能的简单的合理方法加以鉴别?
【正确答案】正确答案:可以用Sanger反应或Edman反应对蛋白质的N末端氨基酸进行测定。Sanger反应中,FDNB可以与肽链N末端氨基酸的α一氨基反应生成黄色的DNP-氨基酸。经Sanger反应若该蛋白的一级结构是直链式的,则可产生黄色的反应;若该蛋白是闭环式的,由于N末端没有α-氨基,则不能出现黄色的反应。而Edman反应中,肽链N末端氨基酸的α一氨基可与苯异硫氰酸酯反应生成PTH一氨基酸,用三氟乙酸处理释放出PTH一氨基酸,再用有机溶剂萃取出来,通过色谱分析可以鉴定出PTH一氨基酸。经Edman反应后,若能测出N末端氨基酸,则该蛋白为直链式;若测不出,则该蛋白为闭环式。另外,理论上讲,如果知道序列,可以找一种合适的蛋白酶切断某一位点,再进行电泳,若该蛋白是闭环式,则电泳结果只产生一条带,且大小不变;若是直链式,则会产生两条带,分子量加起来正好180KDa。
【答案解析】