【正确答案】印迹杂交是指在基因操作中，把DNA或RNA、蛋白质等固定于薄膜上进行杂交，生成杂种分子的技术，是基因操作中最常用的技术。分为Western blotting、Northern blotting和Southern blotting。 (1)Western blotting(蛋白质印迹，免疫印迹) ①实验目的 Western blotting是将蛋白质转移并固定在化学合成膜的支撑物上，然后以特定的亲和反应、免疫反应或结合反应及显色系统分析此印迹。检测的灵敏度较高，可达pg水平。主要用于蛋白质的结构和活性检测等方面研究。 ②主要步骤 a.蛋白质进行SDS-PAGE。 b.固定：将蛋白转移至PVDF膜上。 c.封闭：保持膜上没有特殊抗体结合的场所，使场所处于饱和状态，用以保护特异性抗体结合到膜上，并与蛋白质反应。 d.一抗孵育：与特异性抗体孵育，洗去游离的抗体。 e.二抗孵育：二抗一般带有酶标记，可使底物显色。 (2)Northern blotting ①实验目的 利用DNA可以与RNA进行分子杂交来检测特异性RNA，通过杂交结果可以对特定性状基因在mRNA水平上的表达量进行定性或定量检测。 ②主要步骤 a.经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行RNA电泳。 b.将变性RNA转移至尼龙膜或硝酸纤维素滤膜，烘干。 c.预杂交，时间1～2h。 d.杂交：加入标记的探针，65℃杂交过夜，洗膜。 e.放射自显影。 (3)Southern blotting ①实验目的 主要用于鉴定或寻找与已知DNA同源的DNA片段，如染色体步查、基因组文库的评价和利用、阳性克隆的分析鉴定、转基因拷贝数分析等。 ②主要步骤 a.通过用一种或多种限制性内切核酸酶消化基因组或其他来源的DNA，经过琼脂糖凝胶电泳按大小分离酶切片段。 b.DNA在原位发生变性并从凝胶转移到一固相支持物上(硝酸纤维素膜或尼龙膜)。DNA转移至固相支持物的过程中各DNA的相对位置保持不变。 c.预杂交。目的是用非特异性DNA分子(鲑鱼精DNA)及其他高分子化合物(封闭剂)将待杂交膜中的非特异性位点封闭，从而减少杂交背景，放入65℃的杂交箱或恒温摇床中，一般6～12h。 d.杂交。将标记的DNA探针(如放射性核素标记)与固着在膜上的DNA杂交，洗膜。 e.经X射线片自显影显现出与探针DNA互补的DNA电泳条带的位置，然后进行分析。