问答题 用阳离子交换柱分离氨基酸,在pH=2时,碱性氨基酸和酸性氨基酸相比,哪一个先被洗脱?为什么?
【正确答案】酸性氨基酸先于碱性氨基酸被洗脱。 阳离子交换柱层析是一种用阳离子交换树脂作支持剂的层析法。阳离子交换树脂上含有的酸性或弱酸性基团可以解离出氢离子,与溶液中的阳离子发生交换。在pH=2时,氨基酸的羧基不发生解离,而氨基会发生质子化,因此氨基酸主要以阳离子形式存在。碱性氨基酸带有两个氨基、一个羧基;酸性氨基酸带有两个羧基,一个氨基。发生质子化后,碱性氨基酸所带正电荷明显多于酸性氨基酸。氨基酸与树脂的亲和力主要取决于它们之间的静电吸引,因此,碱性氨基酸与树脂上的阳离子发生交换而被“挂”在树脂上机会多,结合力强;相反,酸性氨基酸则结合力弱。因此当用缓冲液洗脱氨基酸时,酸性氨基酸将先于碱性氨基酸被洗出。
【答案解析】