结构推理 (G+C)mol/%值法、核酸分子杂交法、16SrRNA寡核苷酸测序技术、数值分类法在微生物学分类中如何应用?有何优缺点?
【正确答案】①(G+C)mol/%值法它表示DNA分子中G+C所占的摩尔百分比值,这是目前发表任何微生物新种时所必需具有的重要指标。通过测定多种生物的G+C比后,发现亲缘关系相近的种,其基因组的核苷酸序列相近,但是G+C比相近的两个种它们的亲缘关系不一定相近;G+C比相差很大的两个微生物,它们的亲缘关系必然较远;G+C比相差低于2/%没有分类学上的意义,种间各菌株相差在2.5/%-4.0/%之间。若相差5/%以上就可认为属于不同的种了。
   ②核酸分子杂交法是按照碱基互补的原理,用人工的方法对两条不同来源的单链核酸进行复性,以构建新的杂合双链核酸的技术。此法可用于DNA-DNA、DNA-rRNA和rRNA-rRNA分子间的杂交。是测定核酸分子同源程度和不同物种间亲缘关系的有效手段。它比G+C比更加精确。G+C比相差1/%,则碱基序列的共同区域就约减少9/%,因此G+C比在5/%以内的菌株,要鉴定是否属于同一个物种,就必须用核酸分子杂交法。
   ③16SrRNA寡核苷酸测序技术是一种通过分析原核或真核生物细胞中最稳定的rRNA寡核苷酸序列同源性程度,以确定不同生物间的亲缘关系和进化谱系的方法。这种方法的优点是存在的稳定性、功能的恒定性、含量高易提取、编码rRNA的基因稳定、序列的保守性和相对分子质量适中。其原理是用一种RNA酶水解rRNA后,可产生一系列的寡核苷酸片断,如果两种或两株微生物的亲缘关系越近,则其产生的寡核苷酸片断的序列也越近,反之亦然。
   ④数值分类法又称统计分类法,是一种依据数值分析的原理,借助现代计算机技术对拟分类的微生物对象按大量表型性状相似性程度进行统计、归类的方法。具体步骤是首先计算两株间的相关系数,接着列出相似度矩阵,最后将矩阵图转换成树状谱。由于数值分类法是按大量生物表型特征的总相似性进行分类的,故其结果不可能直接反映系统发育的自然规律,不能当作严格的分类单元。
【答案解析】