问答题 请简述Western blot的原理和步骤。无
【正确答案】

Western blot的中文名称是蛋白质印迹杂交。

(1) Western blot的原理

利用抗原抗体的特异性反应, 用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色, 通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

(2) Western blot的步骤

①将蛋白质样品通过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳) 分离;

②将分离得到的蛋白质样品转移到固 相载体(例如硝酸纤维素薄膜) 上;

③以固 相载体上的蛋白质或多肽作为抗原, 与其相对应的抗体起免疫反应, 再与酶或同位素标记的第二抗体起反应;

④经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

【答案解析】