论述题

有一研究生想使他所感兴趣的一大肠杆菌的基因严格 受碳源控制,在葡萄糖供应时,该基因不表达,当供应乳糖时, 该基因大量表达。你如何帮助他实现这种想法?依据是什么?

【正确答案】

在大肠杆菌中与乳糖代谢相关的基因就是乳糖操纵子,想要实现该生的想法,必须严格遵循乳糖操纵子的调控机制进行。
依据是 lac 操纵子调控机制:
(1) 组成及功能:
① 结构基因(S):有三个,分别为 Z、Y、A,为利用 lac 的三 种酶(β-半乳糖苷酶、通透酶、乙酰基转移酶)编码。
②启动子(P):由转录起始点、识别部位、结合部位组成,是 RNA-pol 与 DNA 结合的位点。
③操纵序列(O):位于结构基因与启动子之间,阻遏蛋白(物) 可与操纵序列结合,此处是控制基因转录的“闸门”。
④调控基因(I):此基因可表达,其产物是阻遏蛋白。
⑤CAP 结合位点:CAP(分解代谢物基因激活蛋白)分子内有 DNA 结合区及 cAMP 结合位点。当 CAP 与 cAMP 结合后,通过分 子内 DNA 结合区与基因的 CAP 结合位点结合,使转录活性提高 50 倍。
(2) 调控机制
阻遏蛋白的负调控: a.当无乳糖存在时,调控基因表 达生成阻遏蛋白,并与 O 序列结合,阻碍 RNA-pol 与 P 序列结 合,操纵子处于关闭状态;b.当有乳糖存在时,lac 操纵子可 被诱导而开放。有乳糖时,乳糖经通透酶催化,进入细胞,由 原存在于细胞中的少数β-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖。 半乳糖作为诱导剂与阻遏蛋白结合,使蛋白质构象改变,而与 O 序列解离,基因开放。
CAP 的正性调节:阻遏蛋白的负调控解释了单一因素变 化时,操纵子的调控机制。但细菌的生长环境是复杂的,当 G 与 lac 并存时,细菌首选 G 作为能源,而不是 lac。其机理是: 当有 G 存在时,细胞内 cAMP 浓度低(因 G 代谢产物能抑制细胞内腺苷酸环化酶和激活磷酸二酯酶,结果细胞内 cAMP 生成 减少,分解加快,水平降低),CAP 与 cAMP 结合受阻,影响 CAP 与 DNA 上 CAP 结合位点的结合,使 Lac 操纵子表达下降。当没 有 G 时,cAMP 水平较高,cAMP 与 CAP 结合,并与启动子附近 的 CAP 位点结合,刺激 RNA 转录活性,使之提高 50 倍。
协调调节:在 lac 操纵子中,lac 启动子是弱启动子, RNA-pol 与之结合的能力很弱,只有当 CAP 结合到启动子上游 的 CAP 位点后,促进 RNA-pol 与启动子结合,才能有效转录。 lac 操纵子的转录起始是由 CAP 和阻遏蛋白两种调控因子来控 制的。阻遏蛋白的负调控与 CAP 的正调控机制,根据存在的碳 源性质,及 cAMP 的水平协调调节 lac 操纵子的表达。

【答案解析】