问答题 一瓶培养的细胞死亡了,如何通过实验来证明它们是否发生了细胞凋亡?
【正确答案】
【答案解析】细胞凋亡的检测是基于凋亡细胞所形成的形态学和生物化学特征,特别是DNA的断裂。
(1)形态学观测:应用各种染色法可观察到细胞的各种形态学特征,有些染料如台盼蓝为活细胞排斥,但可使死细胞着色。DAPI是常用的一种与DNA结合的荧光染料。借助DAPI染色,可以观察到细胞核的形态变化。
(2)DNA电泳:细胞发生凋亡时,DNA发生特征性的核小体间的断裂,产生大小不同的片段,但都是180~200bp的整数倍。
(3)彗星电泳法:彗星电泳的原理是将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶电泳中,经裂解处理后,再在电场中进行短时间的电泳,并用荧光染料染色,凋亡细胞中形成的DNA降解片段,在电场中游动速度较快,使细胞核呈现出一种快速简便的凋亡检测法。
(4)流式细胞分析。