结构推理
讨论影响PCR可靠性的因素。
【正确答案】
(1)温度循环参数:变性温度取决于PCR反应中双链DNA解链的温度;退火温度决定PCR特异性与产量;引物延伸温度温度的选择取决于Taq DNA聚合酶的最适温度。
(2)引物设计:引物长度一般在16~40 bp之间,G+C分布均匀,应避免出现发卡结构和错配现象。引物使用浓度要适宜,浓度过低导致产量下降,过高会出现引物二聚体及非特异性扩增。
(3)DNA聚合酶:高保真耐热型的聚合酶能够保证PCR反应的可靠性。
(4)Mg抖浓度、底物浓度及缓冲体系要适当。
【答案解析】
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