什么是DNA的Tm值?它受哪些因素的影响?
 
【正确答案】(1)DNA的Tm值的定义 DNA的Tm值即DNA的解链温度,是指DNA在加热变性过程中,紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度。Tm值是DNA的一个特征常数。 (2)影响Tm值的因素 ①DNA中G+C的含量 由于G-C碱基对之间有3个氢键,并且它与相邻碱基对间的堆积力更大,因此G+C的含量越高,DNA的Tm值也越高。两者的关系可表示为:Tm=69.3+0.41(G+C)%。 ②溶液中的离子强度 在高离子强度下,负电荷被阳离子中和,双螺旋的结构被稳定保持;在低离子强度下,未被中和的负电荷会降低双螺旋的稳定性。因此,在离子强度较低的介质中,DNA的Tm值较低而范围宽,在较高离子强度下,Tm值较高而范围窄。 ③DNA的均一性 均质DNA解链温度范围较小,而异质DNA解链温度范围较宽。因此Tm值也可作为衡量DNA样品均一性的标准。 ④DNA溶液的pH值 溶液的pH值在5~9范围内,Tm值变化不明显,当pH>11或pH<4时,Tm值变化明显。 ⑤DNA双链本身的长度 相对较短的核酸分子,核酸分子越长,Tm值越大。 ⑥变性剂 主要是通过干扰碱基堆积力和氢键的形成而降低Tm值。
【答案解析】