（1）获得微生物纯培养的方法

①用固体培养基获得纯培养

a．涂布平板法（spread plate method）

b．稀释倒平板法（pour plate method）

c．平板划线法（streak plate method）

d．稀释摇管法（shake tube method）

②用液体培养基获得纯培养：稀释法（shake method）

（2）各自的原理和优缺点

①涂布平板法

a．原理：先将已熔化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌涂布棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。

b．优点：不易造成热敏细菌的死亡，是相对于稀释倒平板法而言更常用的一种纯种分离方法。

c．缺点：不能计数。

②稀释倒平板法

a．原理：先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。

b．优点：如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落。

c．缺点：会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长。

③平板划线法

a．原理：用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。

b．优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。

c．缺点：不能计数。

④稀释摇管法

a．原理：先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热，使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。

b．优点：可分离严格厌氧菌。

c．缺点：操作比较麻烦。

⑤稀释法

a．原理：接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果经稀释后的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。

b．优点：可以分离一些个体大的细菌、许多原生动物和藻类等。

c．缺点：同一个稀释度有较多的平行试管，操作麻烦。