问答题 化学法(Maxam-Gilbert)和末端终止法(sanger)进行DNA测序的原理分别是什么?
【正确答案】化学法(Maxam—Gilbe rt):①:用多核苷酸激酶对待测DNA片段进行32P标记,使其带放射性;
②:将样品分成4份,分别加入硫酸二甲酯、甲酸、肼、NaCl和肼,反应后产生一套片段;
③:反应后将其在同一块凝胶板上电泳,电泳完毕后进行放射性自显影,从电泳图谱上可直接读出序列;
硫酸二甲酯——G;
甲酸——G、A;
肼——C、T;
NaCl和肼——C:
末端终止法(Sanger):①:将待测的DNA加热变性成单链,作为合成模板,并加入与其5'端互补的短链作为引物(引物的5'端用32P标记);
②:将样品分成4份,每一份中加入4中脱氧核苷三磷酸(dNTP)以及一种双脱氧核苷三磷酸(4份中分别加入ddATP、ddGTP、ddCTP和ddTTP),并加入DNA聚合酶催化合成一系列不同长度的片段,每个片段在加入的那种双脱氧核苷三磷酸除终止:
③:合成的产物在同一块凝胶板上进行聚丙烯酰胺凝胶电泳;
【答案解析】