问答题 定量PCR技术的基本原理是什么?它有哪些优点?
【正确答案】
【答案解析】(1)基本原理:1996年美国应用生物系统公司推出实时荧光定量PCR技术和首台荧光定量PCR仪。其原理是在PCR扩增时加入一对引物和一个特异的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5"-3"外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。
(2)优点:定量PCR的优点是实现了PCR从定性到定量的飞跃,比常规PCR特异性更强、无污染问题、自动化程度高;灵敏度显著高于PCR痰涂片法、BACTEC法和改良罗氏培养法。