【正确答案】(1)蛋白质Pull-down的实验原理 利用GST与谷胱甘肽偶联的琼脂糖球珠的亲和性，从混合蛋白质样品中纯化得到相互作用蛋白。利用重组技术将探针蛋白与GST融合，将融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上。当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时就可被吸附而分离，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。 (2)蛋白质Pull-down的主要步骤 ①GST融合蛋白先与下列蛋白溶液之一孵育，包括：a.单一明确的重组蛋白；b.细胞裂解蛋白混合液；c.体外翻译cDNA表达得到的未知蛋白。 ②混合液与谷胱甘肽琼脂糖球珠在4℃反应2h，离心得沉淀。 ③沉淀加入Loading Buffer煮沸3min，高速离心，取上清液进行SDS-PAGE电泳。 ④考马斯亮蓝对SDS-PAGE胶进行染色，观察特异沉降的蛋白带，接着进行质谱分析确定沉降的蛋白；或对电泳后的胶做Western blotting来确定沉降的蛋白中是否含有目的蛋白。