结构推理
假设提取液中含有三种蛋白质成分,其性质如下:
A Mr=20kDa pI=8.5;B Mr=21kDa pI=5.0;C Mr=5kDa pI=5.5。
请设计实验方案来分离纯化这三种蛋白质。
【正确答案】根据这三种蛋白质分子量及等电点差异来设计纯化方案:C与A、B分子量差异大,所以可以选择Sephadex G-50凝胶过滤层析把AB和C分开,先出来的是AB的混合物,后出来的是C。然后AB再根据等电点的差异选择弱阴离子交换柱,缓冲液的pH值为7的条件进行离子交换层析。在pH为7时,A带正电荷,B带负电荷,因而A不被阴离子交换剂所吸附,直接流出,而B被吸附,提高洗脱液的离子强度把B洗脱出来。
【答案解析】