（1）酵母双杂交（Y2H）技术的原理如下：

酵母双杂交系统是一种利用单细胞真核生物酵母在体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的系统。细胞基因转录起始需要转录激活因子的参与，转录激活因子一般由两个或两个以上相互独立的结构域构成，即DNA结合域和转录激活域。前者可识别DNA上的特异转录调控序列并与之结合；后者可与其他成分作用形成转录复合体的，从而启动它所调节的基因的转录。酵母双杂交系统正是利用这个原理来研究蛋白质-蛋白质的相互作用。

（2）酵母双杂交（Y2H）技术的基本操作步骤如下

①将报告基因转化酵母菌株，用培养基筛选。

②同时构建DNA文库，并纯化足够的质粒以转化酵母细胞。

③构建DNA-BD/靶蛋白质粒作为诱饵。

④将上述诱饵质粒转化细胞株，并用固体诱导培养基检测此靶蛋白是否具有直接激活报告基因的活性，以及对酵母细胞是否具有杀伤毒性。

⑤如果不自动激活报告基因，也不具有毒性，则可以在纯化的文库DNA同时顺序转化酵母细胞，并检测质粒转化效率。

⑥阳性克隆的筛选。

⑦用质粒自然分选法筛除只含有AD-文库杂合子的克隆。

⑧酵母杂合试验确定真阳性克隆。

⑨阳性克隆的进一步筛选和确证。

⑩对双杂交系统阳性结果的进一步研究。